VITALSCREEN

Depois de abertos, os reagentes podem ser utilizados até a data de validade (24 meses após a fabricação), desde que sejam armazenados e utilizados corretamente.

Leia a lâmina imediatamente. A nigrosina é tóxica para os espermatozoides. Se a lâmina não for lida imediatamente, o resultado da contagem poderá ser falsamente positivo.

Não. É preferível colocar uma gota sobre a lâmina de microscopia e cobri-la com uma lamínula.

A. Teste interno de controle de qualidade padrão

1. Conte a motilidade da amostra nativa.
2. Misture 50 µL da amostra com 2 gotas de eosina (Reagente 1) de um lote novo.
3. Após 30 segundos, adicione 3 gotas de nigrosina (Reagente 2) do lote novo.
4. Dentro de 30 segundos, coloque 19,5 µL da mistura em uma lâmina de microscopia e cubra com uma lamínula.
5. Conte imediatamente pelo menos 100 espermatozoides (vermelhos = mortos; incolores/brancos = vivos).
6. Repita essas etapas com o lote antigo.
7. Compare os resultados dos lotes antigo e novo.
8. Interpretação: a porcentagem de células mortas deve ser ≤ à porcentagem de células imóveis, ou no máximo 20% superior à porcentagem de células imóveis. Os resultados não devem diferir em mais de 10% entre o lote antigo (referência) e o lote novo.

B. Teste com etanol

Meça a vitalidade da amostra nativa.

1. Misture 50 µL da amostra com 2 gotas de eosina (Reagente 1).
2. Após 30 segundos, adicione 3 gotas de nigrosina (Reagente 2).
3. Dentro de 30 segundos, coloque 19,5 µL da mistura em uma lâmina de microscopia e cubra com uma lamínula.
4. Conte imediatamente pelo menos 100 espermatozoides (vermelhos = mortos; brancos = vivos).

Adicione etanol à amostra até atingir uma concentração final de 21%. Após 5 minutos, todos os espermatozoides estarão mortos.

Meça a vitalidade da amostra com etanol.

1. Misture 50 µL da amostra com etanol com 2 gotas de eosina (Reagente 1).
2. Após 30 segundos, adicione 3 gotas de nigrosina (Reagente 2).
3. Dentro de 30 segundos, coloque 19,5 µL da mistura em uma lâmina de microscopia e cubra com uma lamínula.
4. Conte imediatamente pelo menos 100 espermatozoides (vermelhos = mortos; brancos = vivos).

Deve haver uma diferença clara entre a amostra nativa e a amostra com etanol. O número de células mortas deve ser maior na amostra tratada com etanol.

A FertiPro comercializa apenas um kit de duas etapas, que inclui nigrosina. Isso garante que as células vivas (que não ficam coradas de vermelho) sejam claramente visíveis, pois a nigrosina fornece um fundo escuro. No entanto, a segunda etapa pode ser ajustada reduzindo a quantidade de nigrosina adicionada à mistura, o que resulta em um fundo mais claro. Como alternativa, a segunda etapa pode ser omitida, mas isso pode dificultar a visualização da quantidade de espermatozoides vivos.